食疗养生

问:如何辨别真假燕窝?

答:一.非实验室检验方法:

1.看:燕窝应该为丝状结构,由片块结构构成的不是真燕窝;纯正的燕窝无论在浸透后或在灯光下观看,都不完全透明,而是半透明状。

2.闻:燕窝有特有馨香,但没有浓烈气味。气味特殊,有鱼腥味或油腻味道的为假货; 

3.摸:取一小块燕窝以水浸泡,松软后取丝条拉扯,弹性差,一拉就断的为假货;用手指揉搓,没有弹力能搓成浆糊状的也是假货。

二.实验室检验方法:

1、整体鉴别

1.1化学法:取燕窝粗粉0.3g,加水30ml,水浴中煮沸,滤过。①取滤液5ml加重铬酸钾稀盐酸(4∶1)试液数滴,不产生沉淀。②取滤液1ml,加水100ml,微热溶解后加鞣酸试液数滴,不发生混浊。③取燕窝少量加稀盐酸适量,煮沸10分钟,溶液和样品显棕黄或棕黑色。③燕窝水溶液加1%吲哚醌乙醇与冰醋酸的混合液,正品燕窝呈红棕色,伪品燕窝不呈红棕色。④燕窝水溶液加稀碘液,正品燕窝不变色,伪品燕窝淀粉制品呈蓝紫色。

1.2扫描电镜法:用核酸蛋白仪测定燕窝中糖蛋白、氨基酸,正品燕窝出现高吸收峰(峰值80mm),伪品燕窝的吸收峰低(峰值2mm )。

1.3荧光法

1.31取燕窝样品于紫外光灯(254nm)下观察 正品显黄绿色荧光;燕片显淡蓝紫色荧光;掺假燕窝的掺假部分显黄紫色荧光,未掺假部分显黄绿色荧光;龙牙官燕球王显强蓝紫色荧光。

1.3.2燕窝样品置紫外分析仪上 用365nm紫外线照射,正品燕窝呈蓝绿色荧光。伪品燕窝:皮胶制品呈特亮的紫蓝色荧光,淀粉制品呈黄色及其他颜色的荧光或无荧光。



2、成分鉴别

蛋白质

2.1紫外光谱法:称取研细的各燕窝样品粉末50mg,分别溶于50ml水,用带有冷却水的消化瓶煮沸1小时,离心15分钟(4000r/min)。取上清液进行紫外光谱分析:短嘴金丝燕窝与进口燕窝蛋白质特征吸收峰都在280nm,小白腰雨燕燕窝在285nm,而白腰雨燕在290nm有吸收。

2.2红外光谱法:采用Spectrum One傅里叶变换红外光谱仪和通用衰减全反射附件(universal ATR sampling accessory),硅碳棒光源,DTGS检测器,4cm-1分辨率,16次扫描累加。样品制备:均匀性鉴定是将大块状燕窝研磨后纯样品直接压片放在微ATR附件的钻石探头处测定;非均匀性鉴定是在燕窝上取不同的小块颗粒(大约3mm)样品直接测定。①燕窝的红外图谱在2925cm-1附近的峰为-CH2-和CH3有吸收峰,在1634、1534、1034cm-1附近的吸收峰为蛋白质、氨基酸和多糖类的特征吸收。燕的蛋白质、氨基酸和多糖类含量较丰富,1023cm-1的吸收峰较强,与酰胺Ⅰ带(1634cm-1)的峰强相当。越南燕和泰国血燕在2925cm-1有较明显的吸收峰,其他燕在此处无吸收峰。印尼燕在2937cm-1、马来西亚燕在2970cm-1、菲律宾草燕在2938cm-1有吸收。市售燕窝在2960cm-1处有弱吸收峰。②非均匀性分析:分别选取6种燕窝4种不同位置的小颗粒测定红外光谱图:印尼燕不同颗粒的谱图差别较大,有的颗粒酰胺Ⅰ、Ⅱ和1032cm-1的吸收峰较强;另一个颗粒是1598cm-1、1029cm-1的吸收峰较明显;另两个颗粒是1634、1400和1028cm-1的吸收峰较突出。越南燕与印尼燕的谱图较相似,但未发现1598-1和1029cm-1的特征谱图。马来西亚燕酰胺Ⅰ、Ⅱ和1033cm-1的吸收峰较强的颗粒较多。泰国血燕每个颗粒都有871cm的特征吸收。菲律宾草燕谱图的相似度较大。市售燕窝也与菲律宾草燕的谱图一样。③猪皮屑、银耳与燕窝的对比:天然燕窝在2925cm-1附近的吸收峰强度较弱,而银耳和猪皮屑则在此处吸收较强;猪皮屑的蛋白质、氨基酸类化合物含量较丰富,即酰胺Ⅰ、Ⅱ带(1629、1531cm-1)的吸收峰较强,1039cm-1附近的吸收峰较弱;银耳和猪皮屑在1734cm-1附近会出现脂肪类化合物的特征吸收峰,银耳在1021cm-1的吸收峰很强,以此区别燕窝中是否掺有猪皮屑和银耳。

2.3电泳法

2.3.1燕窝的聚丙烯酰胺凝胶电泳 采用BIO-RAD MODEL 1000/500 POWER SUPPLY电泳仪,MINI-PROTEIN2-DCELL 150B R6738垂直板电泳槽。①样品液制备:取各种燕窝0.15g,加工品为3倍量,先将样品研细,加电极缓冲液5ml于乳钵中研磨成匀浆状,40℃水浴加热3小时,离心,上清液置冰箱中备用。②试剂与凝胶配制:按文献方法制备,其中过硫酸胺浓度为0.14%,分离胶与浓缩胶中均以该浓度的过硫酸胺作催化剂。③加样与电泳:将样品液分别与样品缓冲液[Tris-HC1pH6.8-甘油-0.1%溴酚蓝-重蒸水(2∶2∶0.5∶4.5)]1∶1混合,再将凝胶上贮槽加满电极缓冲液至高出短板0.5cm,取上述溶液各35ul,分别置样品凹槽内,接通电源,电泳开始时,电流控制在20mA,样品进入分离胶后,加大到40mA,保持电流强度不变,待示踪指示剂离前沿1cm处,停止电泳,取出胶版,水漂洗后置固定液中固定过夜,漂洗,于0.01%考马斯亮蓝R250中染色,脱色至背景清晰。④结果:按谱带泳动速度快慢将电泳图谱分为A区(Rf<0.36),B区(Rf<0.69)与C区(Rf≤0.9),并按谱带着色深浅将谱带分为4级,色深者为Ⅰ级带,色浅者为Ⅱ级带,色极浅者为Ⅲ级带,扩散带为Ⅳ级带。天然燕窝在A区有Ⅱ级带3条、Ⅲ级带1条,B区有Ⅰ级带1条、Ⅲ级带2条、Ⅳ级带1条或无,C区Ⅱ级带2条、Ⅲ级带1条,燕碎在A区比燕盏多1条Ⅲ级带,而燕盏在B区比燕碎多1条Ⅳ级带。其他加工品均出现深浅不一的背景,但谱带仍清晰可辨,其中天然燕窝加工品谱带与燕盏相同,宫燕饼在A区与燕碎相同,在B区则与燕盏相同,但在C区少一条Ⅲ级带,其余加工品的谱带均与燕窝的特征带不同。

2.3.2燕窝及其伪品的凝胶电泳 取燕窝细粉约10mg,加6mol/L尿素溶液1ml,超声处理15分钟,离心,上清夜置冰箱中备用。试剂和凝胶按常规方法制备。取上述样品液,加入1/2体积的40%蔗糖溶液,用微量注射器在凝胶样品管中加样,每管加样50ul。在上槽电极冲液中加入5滴溴酚蓝指示剂示踪。电泳开始时,电流控制在每管1mA,数分钟后加大电流至每管3mA,待指示剂行至距玻管底部约1cm时,停止电泳。染色,脱色,剥胶,将胶条浸入稀染色液(考马斯亮蓝R250)过夜,以水漂洗干净,用7%醋酸脱色至背景无色。结果:白燕与毛燕均有7条谱带,且谱带位置相同;血燕有8条谱带;散燕只有一条宽的扩散带;金燕牌特级正官燕球、双燕牌龙牙官燕球、银耳、猪皮屑、琼脂均无谱带。

2.4气相色谱法 采用HP-5890A气相色谱仪;分流/不分流进样口,250℃;氢火焰电离检测器,250℃。HP-5熔融硅毛细管柱,25m×0.32mm×0.52um;升温程序:110-210℃,速率:20℃/ min,保持9min,210-270℃,速度:10℃/min,保持7min。柱头压力40kPa,N2流量25ml/min。①样品预处理:取适量燕窝饮品,加入1倍纯水,用均质机以7000r/min转速处理100s,取30ml移入可透过分子量8000的透析袋,水流中透析24小时,将透析物移入烧杯,真空脱水干燥,称残重。②甲醇解:称取经粉碎的干燕窝样品或经透析处理的燕窝制品干燥残渣7-10mg,置于带Teflon密封螺帽的玻制衍生化小瓶中,加入适量内标物正十九烷酸(n-nonadecanoic acid)-氯仿溶液,晾干后加入1mol/L硫酸-甲醇溶液0.5ml,充氮后封盖,于90℃烘箱90分钟,取出冷却,将反应液移入离心管,加入碳酸钡0.3g中和硫酸,超声振荡5分钟,离心,上清液移入有磨盖的试管中,在35-40℃、低真空抽干甲醇。③乙酰化:在干燥的甲醇解产物试管中加入吡啶1ml、醋酸酐0.5ml,加盖摇匀,置90℃烘箱0.5小时,冷却1小时后,GC检测。④结果:确定了燕窝糖蛋白寡糖链由D-甘露糖(Man)、D-半乳糖(Gal)、N-乙酰氨基半乳糖(Gal NAc)、N-乙酰氨基葡萄糖(GNAc)和N-乙酰神经氨酸(NANA)5种糖组分构成,保留时间依次为:12.76、13.18、17.97、18.20及26.45分钟;且具有特定的量比关系,形成一组容易识别的燕窝“指纹”图。若采用毛燕为定量参照物,用正十九烷酸为内标,在预处理前定量加入样品,在甲醇解处理中衍生为正十九烷酸甲酯(保留时间为19.47分钟),用于定量,不受杂峰干扰。

2.5色谱法 纸色谱法:取燕窝的水浸泡上清液,点样于色谱滤纸上,以水饱和的苯酚溶液展开,晾干,喷以2%茚三酮乙醇溶液,在105℃烘约10分钟。燕窝在Rf值0.2处显一紫色斑点,燕片、掺假燕窝、龙牙官燕球王、琼脂、猪皮及银耳粉末均无斑点。

3.含量测定

唾液酸测定 用热水提取燕窝中的唾液酸糖蛋白,再酸解为唾液酸,可与酸性茚三酮形成稳定的黄色溶液,用比色法测定含量。对燕窝制品(如冰糖燕窝),测定前用透析法除去糖类干扰。


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